تولید لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن فاکتور نوروتروفیک gdnf با تیتر بالا و انتقال آنها به آستروسیتهای انسانی
Authors
abstract
لنتی ویروسها از جمله موثرترین ویروسهای نوترکیب برای انتقال ژن به سلولها و بافتهای پستانداران بشمار میرود. این مطالعه شامل دو بخش اساسی است: (1) بررسی کارائی ستونهای پروتئینی در تولید لنتی ویروسهای نوترکیب با تیتر بالا و (2) بکارگیری این ستونها درتولید لنتی ویروسهای نوترکیب حامل ژن فاکتورنوروتروفیک gdnf. در بخش اول مطالعه با استفاده از دو ناقل انتقال (حامل gfp یا jred) تولید لنتی ویروس نوترکیب کردیم. با انتقال سوپرناتان سلولهای ترانسفکت شده به ستونهای پروتئینی amicon و سانتریفوژ ستونها بیش از 99% سوپرناتان را جدا کردیم تا استوکی در حجم 500 μl از سوپرناتان غلیظ شده و مملو از ویریونها بدست آید. با افزودن رقتهای مختلف این استوک ویروسی به سلولهای هدف، ترانسدوکشن سلولی با موفقیت انجام شد بطوریکه ترانسژنهای گزارشگر در 100% سلولها مشاهده شد. متقابلا تست بخش رقیق سوپرناتان منجر به هیچگونه بیان ژن که نشانگر فعالیت ویروسی باشد نگردید. تولید تیتر بالای ویروسی با روش فیلتراسیون مزبور برای انتقال موفقیت آمیز ژنها اهمیت دارد و از نظر هزینه، حجم کار و زمانبری بر آنها ارجحیت دارد. در بخش دوم این مطالعه، توالی مربوط به فاکتور مهم gdnf را به سازه لنتی ویروسی پیوند زده و به همان روش بالا ویروسهای تیتر بالا تولید کردیم. با انتقال این ویروسها به آستروسیتهای انسانی توانستیم افزایش بیان ژن gdnf را در سطح mrna بمیزان 3 برابر بدست آوریم. این نتایج نشان دادکه لنتی ویروسهای حامل gdnf را میتوان با روش جاری در تیتر بالا تولید کرده و برای مطالعات تمایزی و حفاظت نورونی مورد استفاده قرار داد.
similar resources
ساخت لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن gdnf و بیان آن در سلولهای انسانی
بیماری پارکینسون دومین بیماری شایع در بین بیماری های زوال نورونی در اکثرکشورهای جهان است که حدود 1% جمعیت بالای 65 سال را گرفتار می کند. دلیل اصلی به وجود آمدن این بیماری تخریب پیش رونده نورون های دوپامین ساز در ناحیه substantia nigra pars compacta (snpc) در مغز میانی می باشد زیرا این سلول ها دوپامین می سازند و دوپامین یک نوروترانسمیتر شیمیایی است که سیگنال ها را به ناحیه striatumو سپس به نواحی...
15 صفحه اولساخت لنتیویروسهای نوترکیب ناقل ژن DJ-1 و انتقال آنها به سلولهای انسانی
هدف: اهداف این مطالعه سابکلونینگ ژن (PARK7) DJ-1 به درون وکتور انتقال لنتیویروسی، تولید لنتیویروسهای نوترکیب و آلوده سازی سلولهای هدف با این ویروسها میباشند. مواد وروشها: ژن DJ1 با استفاده از آنزیم های محدود کننده EcoR1 و Xho1 از وکتور pcDNA-DJ1 به دست آمد. وکتور انتقالی لنتی ویروس به صورت همزمان توسط آنزیم های محدود کننده EcoR1 و Sal1 بریده شد. ژن DJ1 توسط آنزیم DNA لیگاز T4 به داخل ...
full textانتقال ژن به سلولهای کبدی رده lmh جوجه بوسیله لنتی ویروسهای نوترکیب
لنتی ویروسها از جمله موثرترین ویروسهای نوترکیب برای انتقال ژن به سلولها و بافتهای پستانداران بشمار میرود. در این مطالعه، عملکرد لنتی ویروسهای انسانی را در انتقال ژن خارجی به سلولهای طیور بررسی کردیم. سه ناقل لنتی ویروسی بنامهای ناقل انتقال (ناقل ترانسفر حامل ژن گزارشگر gfp)، ناقل بسته بندی و ناقل غشائی را همزمان به سلولهای مولد ویروس (رده hek-293t) منتقل کردیم. سوپرناتان سلولهای ترانسفکت شده را...
full textساخت لنتیویروسهای نوترکیب ناقل ژن dj-۱ و انتقال آنها به سلولهای انسانی
هدف: اهداف این مطالعه سابکلونینگ ژن (park7) dj-1 به درون وکتور انتقال لنتیویروسی، تولید لنتیویروسهای نوترکیب و آلوده سازی سلولهای هدف با این ویروسها میباشند. مواد وروشها: ژن dj1 با استفاده از آنزیم های محدود کننده ecor1 و xho1 از وکتور pcdna-dj1 به دست آمد. وکتور انتقالی لنتی ویروس به صورت همزمان توسط آنزیم های محدود کننده ecor1 و sal1 بریده شد. ژن dj1 توسط آنزیم dna لیگاز t4 به داخل و...
full textهمسانه‌سازی ژن SOX2 انسانی در ناقل لنتی ویروسی و القای ژنی در سلولهای HEK293T
چکید ه سابقه و هدف ژن SOX2 در میان گونه‌ها، حفاظت شده بوده و از فاکتورهای مهم در القای سلولهای پیش‌ساز از سلولهای تمایز یافته می‌باشد که موجب حفظ خاصیت پرتوانی سلولهای پیش‌ساز می‌شود. SOX2 ، OCT4 ، cMYC و KLF4 سبب باز برنامه‌نویسی سلولهای سوماتیک به سلولهای بنیادی می‌شوند. امروزه از ژن SOX2 در جهت تولید سلولهای iPS و سلول درمانی استفاده می‌شود. در این تحقیق همسانه‌سازی ژن SOX2 در نا...
full textساخت لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن هورمون رشد فیل ماهی (huso huso) و بررسی بیان ژن در رده سلولی بنیادی جنینی انسانی hek293t
ماهیان خاویاری به دلیل توانایی آنها در تولید خاویار (مروارید سیاه) از اهمیت ویژه ای در صنعت شیلات و آبزی پروری برخوردارند و از جمله با ارزش ترین ذخایر شیلاتی دریای خزر محسوب می شوند. در این مطالعه توالی کامل ژن کد کننده هورمون رشد (gh) فیل ماهی استروژن huso huso بعنوان یکی از مهمترین گونه های ماهیان خاویاری ایران، که با استفاده از rna استخراج شده از غده هیپوفیز سنتز شده بود، در یک وکتور غیر ویر...
15 صفحه اولMy Resources
Save resource for easier access later
Journal title:
زیست فناوری دانشگاه تربیت مدرسPublisher: دانشگاه تربیت مدرس
ISSN
volume دوره 2
issue شماره 1 2011
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023